Program je namijenjen znanstvenicima, istraživačima i tehničarima koji planiraju po prvi puta započeti istraživanje koje uključuje upotrebu real-time metode te iskusnijim istraživačima koji imaju želju bolje se upoznati s mogućnostima ove metode te na taj način unaprijediti svoje eksperimente. Program uključuje teoretsko upoznavanje sa razvojem metode te sa svim značajnim tehnologijama i uređajima za real-time PCR analizu s naglaskom na prednosti i nedostatke pojedinih metoda i uređaja te njihovu primjenu. Praktični dio uključuje rad s uzorkom od izolacije RNA i DNA do real-time analize i obrade rezultata. Polaznici će pohađanjem tečaja steći sposobnost odabira prikladnog uređaja te specifične metode prikladne svom cilju te iskustvo individualnog rada na cjelokupnom procesu od uzorka do obrade rezultata. Stečeno znanje moći će iskoristiti u idealnom planiranju i vođenju svojih eksperimenata.

1. DAN (8 sati):

• Sastavi otopina za ekstrakciju DNA iz raznih izvora

• Metode ekstrakcije DNA iz više vrsta bioloških uzoraka

 

• Metode ekstrakcije RNA
• Kvalitativna i kvantitativna analiza nukleinskih kiselina (analiza gel elektroforezom, spektrofotometrijska analiza)

• Uvod u princip metode PCR – aplikacije, komponente i uvjeti reakcije
• Pretraga baza nukleotidnih slijedova
• Odabir početnica
• Priprema PCR reakcije, mogućnosti optimizacije PCR reakcije
• Analize rezultata PCR reakcije.

 

2. DAN (8 sati):

• Osnove metode real-time PCR
• Metode detekcije produkta real-time PCR-a i područja primjene (hydrolisis probes, Sybr Green…)
• Moguće primjene real-time PCR-a i postojeće tehnologije; njihove prednosti i nedostatci
• Dizajn početnica i proba
• Alelna diskriminacija, analiza ekspresije gena(relativna i apsolutna kvantifikacija), end-point analize, copy number assay, plus/minus assay
• Planiranje i optimizacija reakcije s naglaskom na moguće probleme i rješenja
• RT PCR – mogućnosti i optimizacija (one-step RT, two step RT, random priming…)
• Analiza ekspresije gena
• Pregled rezultata i obrada podataka
• Smjernice za objavu rezultata real-time eksperimenta (Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments – MIQE)